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本研究旨在建立牛IFN-γ体外释放法,为牛结核病的免疫学诊断提供一种快速、有效的新检测技术。分别以获得的牛IFN-γ单克隆抗体Bo-mAb1作为捕获抗体,以Bo-mAb2H作为检测抗体,建立了基于双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)的牛IFN-γ体外释放法。该方法的最低检出限为3.12 ng•mL-1,可特异性检测出重组牛IFN-γ(Bac-BoIFN-γ)及天然BoIFN-γ,...
基于重组Erns蛋白的猪瘟ErnsELISA的建立和优化
猪瘟 Erns-ELISA 鉴别诊断
2013/12/11
将大肠杆菌表达的猪瘟病毒重组Erns蛋白经纯化后作为包被抗原,建立了检测猪瘟抗体的Erns-ELISA方法。经优化试验,确定了最适抗原包被量为0.15 μg;血清最适稀释度为1∶100。经阻断试验、交叉反应试验和重复性试验证明,建立的Erns-ELISA简便、特异、稳定,与基于重组E2蛋白的E2-ELISA的符合率高达96.7%,与基于全病毒抗原的Dot-ELISA符合率为77.5%。可以用于猪瘟...
原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M),并以此作为包被抗原建立间接ELISA检测方法,与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELISA方法进行比较。根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP-Flury株M基因序列设计特异性引物并引入SmaⅠ和NotⅠ酶切位点,经RT-PCR扩增得到目的基因,连接pCR®2.1载体,构建重组质粒pCR-RV-M,重组质粒用SmaⅠ和NotⅠ进行双酶...
重组抗原rMIC3-ELISA检测猪弓形虫抗体的研究
刚地弓形虫 rMIC3 ELISA 检测
2010/1/7
[目的]探讨检测猪弓形虫病的新方法。[方法]应用纯化的重组弓形虫微线体蛋白3(rMIC3)作为包被抗原建立间接ELISA 方法,用于猪弓形虫抗体的检测。[结果]该法所用最佳抗原浓度为3.40 μg/ml,最适宜的血清稀释倍数为1〖DK〗∶160,与猪瘟病毒等阳性血清不发生交叉反应,与LAT的符合率为92.56%。[结论]该方法快速、特异、重复性好,可用于猪弓形虫病的诊断和流行病学的调查。
口蹄疫3A蛋白间接ELISA诊断试剂盒
口蹄疫 ELISA诊断试剂盒
2008/11/21
试剂盒关键技术包括:口蹄疫3A基因的RT-PCR扩增;口蹄疫3ABC基因的克隆及序列分析;口蹄疫3A蛋白基因重组表达质粒构建;口蹄疫3A蛋白基因在大肠杆菌中表达等。该试剂盒具有较好的特异性、灵敏性、稳定性,可以区分口蹄疫病毒感染抗体和疫苗免疫抗体,具有较好的应用前景。
该成果首次对牛结核分枝杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白(Mce4 E)和牛结核分枝杆菌复苏因子C进行体外重组表达,并应用于牛结核分枝杆菌诊断抗原的研究,同时我们也对牛结核分枝杆菌优势血清蛋白MPB83进行了研究,创造性的将三种重组融合蛋白进行抗原包被,建立了牛结核病间接ELISA诊断方法,大大的提高了ELISA诊断试剂盒的特异性和敏感性,从而兼顾快速、便捷的同时增加了诊断的可靠性。
兔出血症重组抗原间接ELISA试剂盒研制及应用
兔 出血症 重组抗原间接ELISA试剂盒
2008/10/16
RHDV属杯状病毒科,VP60蛋白是其唯一的结构蛋白,也是免疫原性蛋白。在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达的VP60蛋白可以自我组装成病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),其在结构、免疫原性和抗原性上与自然病毒颗粒十分相似,采用生物技术手段,利用现有资源,将昆虫细胞中表达的重组VP60蛋白作为诊断抗原,建立间接ELISA检测方法,筛选反应试剂,优化反应条件,组装试剂盒,满足...
奶牛结核病间接ELISA检测方法的研究
结核病 奶牛 ELISA重组 多抗原
2008/10/8
该项目属于应用技术研究领域,适用于由牛分枝杆菌和结核分枝杆菌引起的动物结核病的快速检测。该研究利用spliced by overlap extension (SOE)技术,PCR扩增牛分枝杆菌抗原mpb70、mpb83和esat-6的三串联基因mpb70-83-e6,分子克隆和重组表达了融合蛋白M70-83-E6,并以此作为诊断抗原,通过对ELISA各项反应条件的优化,建立了特异、敏感的间接ELI...
应用BA-ELISA法检测结核病牛血清中抗体的研究
牛 血清结核病 BA-ELISA法
2008/9/10
本研究课题通过引入生物素-亲和素-酶复合物酶联免疫吸附试验,检测牛血清中结核抗体存在情况,为进一步研究结核病病理及找新的敏感性高、特异性强、节省人力、物力的诊断方法提供依据。试验总结了前人的经验,用295头份牛血清,进行了BA-ELISA、ELISA检测,并进行了特异性、稳定性等对比试验,结蜾表明BA-ELISA法优于ELISA法和PPD皮变反应。可作为目前广泛应用的PPD皮变反应的辅助诊断方法。...
猪繁殖与呼吸综合征ELISA诊断试剂盒的研究
试剂盒 ELISA猪 繁殖与呼吸综合征 N蛋白表达抗原
2008/8/1
新产品知识产权形式:项目合作方式:技术服务成果完成单位:中国动物卫生与流行病学中心成果摘要: 该课题为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)间接ELISA试剂盒的研发。该课题通过克隆了PRRSV核衣壳蛋白基因,与野生型杆状病毒共转染sf9细胞表达了PRRSV蛋白质;对重组杆状病毒在大批量生产工艺方面进行了研究,证明重组杆状病毒非常稳定。以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,对各种条件进行优化,建立了检测PRR...