搜索结果: 1-10 共查到“兽医科学基础学科 转染”相关记录10条 . 查询时间(0.304 秒)
旨在构建敖汉细毛羊BMP6、BMPR1B基因的过表达载体，而后将其导入成纤维细胞，分析转染后两基因mRNA、蛋白表达量的变化及基因间相互作用对毛囊的影响。选择40日龄敖汉细毛羊胎羊，采集组织样品，提取RNA后反转录成cDNA，通过PCR反应后利用SoSo试剂盒将纯化的目的片段与表达载体pcDNA3.1连接。酶切鉴定正确后，转至大肠杆菌DH5α感受态细胞，振荡培养并挑取单菌落扩大培养。提取质粒后将p...
旨在利用同源重组构建敖汉细毛羊Hoxa5、BMP6基因表达载体及共转染成纤维细胞后通过基因表达量变化研究两基因之间的相互作用关系。以敖汉细毛羊为研究对象，采集30日龄的胎羊。首先，通过RNA的提取反转录成cDNA参照GenBank中Hoxa5、BMP6基因序列和pcDNA3.1序列分别设计1对含有同源臂的引物，通过PCR反应扩增获得Hoxa5、BMP6基因片段、利用SoSo试剂盒将目的片段连接到p...
pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞建系的研究
pEGFP-hTERT hTERT基因 BRL-CM 鸡胚胎干细胞
2014/9/26
本研究旨在通过构建重组质粒pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells，cESCs)，优化鸡胚胎干细胞培养体系，以期构建鸡胚胎干细胞株或细胞系。在获得hTERT基因后，构建重组质粒pEGFP-hTERT，并利用FuGENE@HD转染鸡成纤维细胞(DF-1)，转染24 h后，荧光显微镜检测；再以80% BRL-CM（大鼠肝细胞条件培养基）与20% ...
稳定转染纤维素酶相关基因的猪胎儿成纤维细胞系的建立
双筛选标记 纤维素酶 2A 猪胎儿成纤维细胞
2013/11/29
旨在构建带有双筛选标记的纤维素酶基因的腮腺特异性表达载体，筛选稳定转染该载体的猪胎儿成纤维细胞系，为制备转纤维素酶基因的转基因克隆猪提供核供体细胞。采用SOE-PCR和PCR方法，分别扩增获得筛选标记基因NEO-T2A-EGFP序列和纤维素酶相关基因的融合序列SP-EGX-F2A-BGL1，构建腮腺特异性表达载体pPSP-SP-EGX-F2A-BGL1-CMV-NEO-T2A-EGFP，经PCR、...
为了为核移植提供供体细胞,本研究构建了真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1,并研究了牛胎儿皮肤成纤维细胞的体外分离培养,进行了Ipr1基因转染。克隆Ipr1基因和SR-A启动子,并构建了巨噬细胞特异性真核表达载体。用组织块贴壁法分离培养牛胎儿皮肤成纤维细胞,在体外经传代、纯化后,用电穿孔法将真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1转染至经体外纯化的第4～10代牛胎儿成纤维细胞,24h后观察荧光...
旨在分析生长抑素重组质粒pEGS/2SS转染HeLa细胞（人宫颈癌上皮细胞）转染效果的影响因素，探讨最佳转染条件，为进一步研究生长抑素基因疫苗的作用机制和作用效果奠定基础。以脂质体转染法将带有绿色荧光蛋白（GFP）报告基因的重组质粒pEGS/2SS转染HeLa细胞，探讨质粒转染HeLa细胞最佳条件的4个参数：质粒DNA剂量、脂质体剂量、最佳转染时间和质粒提取方法，在荧光显微镜下观察细胞转染情况并计...
本研究旨在构建绵羊胰岛素样生长因子l（IGF1）毛囊特异表达载体pCDsRKI，并转染绒山羊胎儿成纤维细胞，最终获得稳定表达红色荧光并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过RTPCR方法获得IGF1 cDNA，其与KAP61基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成IGF1毛囊特异表达载体pCDsRKI（大小7.4 kb）。以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞，外源性表达载体...
牛胎儿成纤维细胞的组织块贴附法分离培养与电穿孔法基因转染
牛胎儿成纤维细胞 分离培养 电穿孔 转基因
2008/6/10
为获得转基因克隆牛的供体细胞，采用组织块贴附培养的方法分离培养牛胎儿皮肤成纤维细胞，经2～3次传代纯化，绘制生长曲线，分别分析体外传代培养10代以内和20代以上细胞的核型特征。分别采用800、900、1 000 V/cm和1、5、10、15和20 ms的参数组合，将线性化的带有新霉素抗性和绿色荧光蛋白双重筛选标记的人胰岛素原乳腺特异表达载体pNEI电穿孔转入体外培养的牛胎儿成纤维细胞，经800 μ...
将克隆的梅山猪LH-β基因亚克隆到真核表达型载体VR1020上，通过质粒PCR的方法在转化子中筛选阳性克隆，用BamHⅠ、BglⅡ双酶切鉴定重组子。得到的重组真核表达质粒转染Cos7细胞株，RT-PCR检测猪LH-β表达情况。然后用VPLH-β质粒、VR1020分别肌肉注射小鼠，研究了小鼠的生殖特性情况。结果显示：通过质粒PCR和双酶切分析，得到猪LH-β基因以正确方向插入的重组真核表达质粒VPL...