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复旦大学生命科学学院人类进化课件 人类进化-pcr扩增实验课实验步骤。
摘要应用PCR-SSO基因分型技术，对我国云南西部地区3代内无血缘关系的76个彝族健康个体进行了HLA-DQB1位点的基因分型。结果显示，在DQB1的38个等位基因中，观察到13个等位基因。云南西部彝族表现为DQB1*0301（36.18%～36.84%）最常见。其他频率大于5%的等位基因还有DQB1*0502（10.53%～11.18%）、DQB1*0401（9.21%）、DQB1*0302 （...
摘要建立简便、实用的DYF155S1基因座基因分型的银染和荧光标记半自动分析方法，对中国汉族155个无关男性个体血样本DNA进行分型，两种方法分型结果一致。155人共检出66种等位基因，有38个等位基因仅出现1次。根据图谱中第一条DNA片段及DNA条带数从小至大命名，频率最高的为18和22号等位基因，其第一条DNA片段大小为180bp，DNA条带数为连续的16和17个，频率均为0.065。这一位点...
人类YAC库PCR三维筛选体系的建立及质量考核
CEPH YAC库 PCR筛选体系 荧光原位杂交 FISH
2008/1/23
为了在知道某个区域、位点、基因或DNA片段的部分信息后,能从CEPH YA C库中筛选出与其对应的YAC克隆,为进一步研究奠定基础,需要建立一个筛选体系。本文概述了这一筛选体系的建立过程。随后,用两对与已知基因对应的引物进行了筛选验证工作, 证明了这一体系的可用性,同时提出了以后筛选的途径, 即首先筛选YAC库的Mega YAC部分,并以5块板为一组进行筛选。另外,运用荧光原位杂交技术(FISH)...
非同位素PCR-SSCP方法的初步临床应用
非同位素 PCR-SSCP 平滑肌肉瘤 Alzheimer病
2008/1/10
单链构象多态性检测法 (PCR-SSCP)是近年发展起来的一项检测人类基因组突变的新技术。然而,在该技术中需要使用放射性同位素标记的核苷酸或引物,从而限制了其广泛临床研究及诊断方面的应用。本文报告一种改进的PCR-SSCP方法, 该方法不用同位素标记引物,而直接在溴乙啶染色的聚丙烯酰胺凝胶上显示SSCP。用该方法对55例平滑肌肉瘤p53基因第7外显子突变的检测表明,38%的瘤组织DNA存在异常的S...
人类血小板抗原1～6系统同步基因分型的研究Study on the Simultaneous Genotyping of Human Platelet Antigens of 1, 2, 3, 4, 5, 6 System by PCR-SSP and Its Applications
序列特异性引物—PCR 人类血小板抗原 基因分型
2008/1/8
摘要
为研究采用PCR—SSP技术，建立可靠的人类血小板抗原HPA-1,2,3,4,5,6系统的同步基因分型方法，并以所建立的方法研究血小板抗原。设计合成18条序列特异性引物，探索最佳退火温度，通过调整引物浓度、Mg2＋离子浓度，使HPA-1~6系统等位基因在同一条件下进行同步扩增和扩增产物在同一凝胶中进行同步电泳。引物的特异性和灵敏度采用基因型已知的质控DNA进行验证。应用此方法，对2000年...
对159名中国辽宁汉族个体的基因组DNA进行分析，共检出42种等位基因，其中以DRB1*09012(12.8%)、*0701(10.7%)、*1501(10.4%) 最为常见，其次为DRB1*1201(7.9%)、*1202(7.5%)、*1101(6.6%)、*0301(5.0%)。并发现辽宁汉族人DRB1等位基因频率与白种人间存在明显差异，揭示不同人种有其自己的主要等位基因。同时对本技术在HL...
人类MINK基因的两种突变导致长QT综合征（LQTS）。我们设计了两对引物利用PCR-SSCP结合直接测序法在病人及健康者中对MINK基因进行分析，结果发现第149位密码子产生A→G转换。在所研究的对象中，此变化在病人及正常对照者中均有存在。提示MINK基因的此突变性质为非病理性的多态突变。
摘要 肿瘤细胞对化疗药物的抗性是癌症有效化疗的主要障碍。人类细胞中多药抗性基因(MDR1)编码一种p-糖蛋白,后者功能是能量依赖的跨膜药物外输泵,可降低细胞毒药物在胞内的积累。定量分析MDR1表达水平可说明病人抗药能力的高低。本文应用PCR技术建立了灵敏度高、专一性好、可定量检测临床标本中MDR1表达水平的方法。对周血标本的初步检测表明:白血病化疗效果与MDR1表达水平的高低有关。
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荧光差异显示PCR分离果蝇七氟醚敏感性相关基因
荧光mRNA差异显示PCR 七氟醚敏感性基因 果蝇
2008/1/3
摘要 吸入麻醉药是临床上常用的一类全身麻醉药 .为深入研究吸入麻醉药的作用机理 ,以本实验室创建的对七氟醚敏感的果蝇品系 (F PS1 )和耐药 (F PR1 )的果蝇品系为研究模型 ,以野生型黑腹果蝇 (Drosophilamelanogaster)为对照 ,应用荧光mRNA差异显示PCR (fluorescentdifferentialdisplayreversetranscriptional...
用多重PCR检测上海地区汉族人群9个STR基因座的多态性The Polymorphism Distributions of Nine STR Loci in Shanghai Han Population
STR基因座 上海地区汉族人
2007/12/29
利用多重PCR和四色荧光（5-FAM，JOE，NED和ROX）自动化检测技术调查上海地区汉族人群D3S1358、vWA、FGA、D8S1179、 D21S11、 D18S51、D5S818、D13S317、D7S820等9个STR基因座多态性分布并计算该9个基因座的基因频率（Pi）、个体鉴别力（DP）、无偏倚期望杂合性（H）、多态性信息含量（PIC）和非父排除概率（PE）。结果显示：9个STR基因...
PCR-SSP技术对广东汉族人HLA-DR基因分型
ＨＬＡ0ＤＲ ＰＣＲ-ＳＳＰ 基因分型 基因频率
2007/12/18
摘要 探索具有高分辨率、高特异性和简捷快速的方法对ＨＬＡ－ＤＲ基因分型，为临床器官移植配型和疾病相关性分析提供实用的方法和基础资料．利用ＤＲ１～ＤＲｗ１８序列特异性的１９组引物及１对内参照引物进行ＰＣＲ扩增即ＰＣＲ－ＳＳＰ对ＨＬＡ－ＤＲ进行基因分型，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，在紫外光下观察分型结果．每个被检个体的ＤＲ型别可由特异引物扩增出现的电泳谱带直接判断．双盲检测２２例的结果１００...
应用RT-PCR检测基因的体外转录活性
体外转录 ＲＴ－ＰＣＲ 基因转录调控
2007/12/18
摘要 体外转录分析已广泛应用于分子生物学领域．由于体外转录所产生的ＲＮＡ的量极少，需有灵敏的方法检测生成的ＲＮＡ．本研究发展了一种基于ＲＴ－ＰＣＲ技术鉴定体外转录产物的方法．将待研究基因的启动区与任何一段已知的含转录起始位点的编码序列相连，制备成体外转录的模板．体外转录后，用ＤＮａｓｅⅠ将ＤＮＡ模板完全降解；生成的ＲＮＡ经反转录合成ｃＤＮＡ；再以ｃＤＮＡ为模板，用相应的引物进行ＰＣＲ扩增，产物用琼...