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本研究的目的是探索副结核分枝杆菌特异性蛋白MAP0862在牛副结核病血清学诊断中的作用，建立牛副结核病特异性ELISA诊断方法。将通过原核表达获得的副结核特异性蛋白MAP0862纯化并定量后作为包被抗原，经过一系列条件优化后初步建立了牛副结核病间接ELISA诊断方法。使用牛副结核阳性血清、牛布病阳性血清、牛结核阳性血清、卡介苗免疫牛血清、牛大肠杆菌阳性血清以及健康阴性牛血清对该方法的验证表明其具有...
Validation of a monoclonal antibody-based ELISA for the quantification of the furazolidone metabolite (AOZ) in eggs using various sample preparation
monoclonal ELISA nitrofuran AOZ eggs sample preparation validation
2015/3/5
A monoclonal-based ELISA, coupled with an assay buffer, solvent and solid phase extraction procedures, was validated for use in the monitoring of egg samples for 3-amino-2-oxazolidinone (AOZ). The pro...
以纯化的基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C) VP1重组蛋白作为包被抗原，建立检测DHAV-C抗体的间接ELISA方法。结果表明，试验的最佳条件：用pH9.6、0.05 mol•L－1的碳酸盐缓冲液将包被抗原稀释成5 μg•mL－1，4 ℃包被过夜，抗体稀释度为1∶100，HRP酶标羊抗鸭IgG稀释度为1∶5 000，封闭液为含10%脱脂乳的0.01 mol•L－...
多头带绦虫Tm7基因的表达及间接ELISA检测方法的建立
脑多头蚴 重组抗原 Tm7 间接ELISA
2013/12/3
以多头带绦虫Tm7重组蛋白为抗原，建立动物多头蚴病早期诊断方法。本研究从羊脑多头蚴原头节提取总RNA，采用RT-PCR技术首次扩增出Tm7基因的全序列，该基因的开放阅读框为207 bp，编码68个氨基酸。将此基因克隆到pET-32a(+)载体，构建重组表达质粒pET-32a-Tm7，经转化大肠杆菌BL21（DE3）后IPTG诱导表达，用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物。以纯...
在多克隆抗体的基础上研制一种用于检测动物源性食品中磺胺二甲嘧啶（SMZ）残留量的直接竞争酶联免疫吸附测定法（ELISA）试剂盒，并与高效液相色谱（HPLC）分析方法比较和验证。将磺胺二甲嘧啶添加到猪肝、猪肉和鸡肉样品中，用所制备的试剂盒和HPLC分析方法检测样品中的磺胺二甲嘧啶残留，并对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定。研究结果表明，磺胺二甲嘧啶浓度在0.5~50 ng·mL...
猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2，SS2）是一种广泛分布的人畜共患病原菌，严重危害着人类健康和养猪业的发展。本试验旨在研究分泌核酸酶基因（SsnA）作为分子诊断标识在对SS2感染的鉴别诊断中所起的作用。作者以SS2-LT菌株基因组DNA为模板，通过PCR扩增SsnA基因片段，将该片段克隆到表达载体pET-28a(+)中，在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达，获得大...
以合成肽为抗原建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测ELISA试剂盒
FMDV ELISA 合成肽
2010/4/8
【目的】建立合成多肽抗原检测FMD NSP 抗体的 ELISA 方法。【方法】固相法合成特异性FMDV NSP B细胞表位肽,将其偶联在BSA载体蛋白上,作为抗原包被在ELISA板上,制备检测抗FMDV NSP抗体的ELISA 试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核。【结果】抗原包被浓度选择2.5μg•mL-1; 检测199 份血清标本,与美国UBI商品试剂盒符合率达到96.48%,与国产3...
鹿血双抗体夹心间接ELISA检测方法的建立
鹿血 ELISA 多克隆抗体
2011/8/16
通过制备兔抗鹿血和小鼠抗鹿血多克隆抗体,建立了以兔抗为包被抗体,鼠抗为检测抗体的鹿血双抗体夹心间接ELISA检测方法。采用方阵滴定法确定了抗原、抗体的最佳反应浓度,并对ELISA各反应条件进行优化。结果表明:兔抗最佳包被浓度为1∶8 000,鼠抗的最佳反应浓度为1∶2 000,最佳封闭时间为60 min。该方法对鹿血检测灵敏,可达3×10-4倍稀释度,且对马血、牛血、羊血、猪血的检测结果均为阴性...
抗猪肺炎支原体IgA间接ELISA检测方法的建立
猪肺炎支原体 IgA 间接ELISA
2009/11/3
为了更准确地对猪肺炎支原体感染及免疫状况进行检测，作者拟建立抗猪肺炎支原体IgA间接ELISA检测方法。在比较了猪肺炎支原体全菌抗原和粘附因子P97R1原核表达蛋白后，选择后者作为包被抗原；以羊抗猪IgA为二抗，兔抗猪IgGHRP作为酶标三抗，并分别对包被抗原的浓度、样品的孵育时间、二抗与三抗的最佳稀释度和作用时间以及显色液的作用时间作了优化。最终建立了稳定而特异的抗猪肺炎支原体IgA的间接EL...
猪水肿毒素单抗竞争ELISA试剂盒的研制及应用
猪水肿毒素 单克隆抗体 单抗竞争ELISA 抗体检测
2009/9/8
本研究旨在建立猪水肿毒素抗体的快速检测方法。以纯化的猪水肿毒素A亚基基因片段的原核表达产物作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单抗，并利用表达蛋白和猪水肿毒素A亚基单抗酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪水肿毒素抗体。经过研究确定抗原包被浓度为032 μg·mL-1，待检血清最佳稀释度为1∶2，酶标单抗工作浓度为1∶3 200，血清抑制率大于40%为阳性。应用单抗竞争ELISA和细胞毒性中和试验同...
鸡肉中氟苯尼考ELISA检测方法的建立及应用
氟苯尼考 残留检测 间接竞争ELISA
2009/8/31
【目的】制备抗氟苯尼考（FFC）的高亲和力特异性抗体，建立检测氟苯尼考的间接竞争ELISA新方法。【方法】氟苯尼考分别与牛血清白蛋白（BSA）和人血清白蛋白（HSA）经混合酸酐法偶联，得到免疫抗原和包被抗原，其偶联比分别为14.4和14.7。用免疫原FFC-HS-BSA免疫新西兰大白兔获得了效价较高的特异性抗体。建立并优化了间接竞争ELISA检测方法。【结果】抗血清效价为1﹕102 400。最佳包...
Preparation of Monoclonal Antibody Against Chicken Apolipoprotein B and Development of Enzyme Liked Immunosolvent Assay (ELISA) Method with the Antibody Aiming at the Optimization of Lipid Metabolism in Chickens
apolipoprotein B monoclonal antibody enzyme linked immunosorbent assay fat deposition broiler chickens
2009/7/31
Apolipoprotein B (apoB) containing lipoproteins are major lipoproteins in blood and the elevated concentration in plasma may lead to increased transport of lipoproteins into adipose tissues resulting ...
奶牛孕酮间接竞争ELISA检测方法的建立
奶牛孕酮 间接竞争ELISA 定量检测
2009/6/16
[ 目的] 为孕酮检测试剂盒的研制奠定基础。[ 方法] 采用二环己基碳化二亚胺法制备检测抗原, 建立了检测奶牛孕酮含量的间接
竞争ELISA 方法。[ 结果] 检测奶牛孕酮的间接竞争ELISA 的最佳反应条件确定为: 最佳包被浓度为100 ng/ ml , 碳酸盐缓冲液的包被效果较好, 以4 ℃过夜+ 37 ℃ 2 h 佳, 最佳封闭液为2% 山羊血清, 酶标抗体的工作浓度为0 .13 μg/ ...
牛乳铁蛋白直接竞争ELISA 检测法的建立
牛乳铁蛋白 cELISA 定量检测
2009/6/16
[ 目的] 建立一种检测牛乳铁蛋白( LF) 含量的竞争ELISA 检测方法。[ 方法] 制备鼠抗牛LF 单克隆抗体, 采用直接竞争ELISA 测定
酶标记物效价, 建立牛LF 的直接竞争ELISA 检测方法。[ 结果] 纯化后, 制备的鼠抗牛LF 单抗效价达1∶1 280 000 , 且鉴定为IgG1 。该单抗对牛乳铁蛋白具有很强的特异性。制备酶标单抗的效价为1∶640 000 。抗原包被物和...