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搜索结果: 1-14 共查到兽医学 shRNA相关记录14条 . 查询时间(0.066 秒)
旨在进一步揭示MSTN在绵羊成肌细胞中的调控机制,制备可有效失活MSTN基因的工具,为通过RNA干扰技术提高绵羊产肉量提供方法和理论依据。本研究以绵羊成肌细胞为试验材料,构建特异靶向绵羊MSTN基因的shRNA干扰质粒载体,将干扰效果好的质粒进一步包装为重组腺病毒,转染细胞后采用qRT-PCR和Western blot检测MSTN基因以及生肌调节因子和干扰素反应基因的表达。结果表明,质粒ShR21...
利用慢病毒表达技术将稳定持续抑制PRRSV复制的shRNA导入Marc-145细胞,建立稳定表达靶向抑制PRRSV复制的shRNA的Marc-145阳性细胞克隆,并从细胞模型水平阐明抑制PRRSV复制的关键靶基因的干扰效果。采用LR重组技术,将pENTR/U6/Nsp9-4、pENTR/U6/Nsp9-6及pENTR/U6/-CON分别与pDEST载体进行LR重组,获得表达骨架,重组后的表达载体在...
旨在构建内蒙古白绒山羊成纤维细胞生长因子Ⅴ(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因shRNA真核表达载体(pRNAT-shRNA)。以内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞总RNA为模板,PCR扩增FGF5基因。设计并合成3条FGF5基因的靶向shRNA序列,分别插入pRNAT-U6.1/Neo载体中,构建重组干扰质粒载体pRNAT-shRNA1、pRNAT-shRNA2和pR...
本试验旨在克隆水牛阴阳因子1(YY1)基因,并筛选获得可有效抑制水牛YY1基因表达的shRNA干扰片段。以水牛成纤维细胞cDNA为模板,采用RT-PCR方法,扩增水牛YY1基因CDS序列,将其连接插入到pMD18-T载体中,进行序列测序并分析。采用Xho I和EcoR I双酶切,将水牛YY1基因编码区定向克隆至pEGFP-N1载体中,构建其真核表达载体pYY1-EGFP-N1。设计2条靶向水牛YY...
为研究视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4, RBP4)对猪前体脂肪细胞分化的影响,笔者构建了RBP4重组慢病毒干扰载体,包装并感染猪前体脂肪细胞,采用BODIPY和油红O染色以及real-time PCR等方法,从形态学和基因表达水平检测抑制RBP4表达对成脂分化的作用。研究结果显示,RBP4重组慢病毒干扰载体构建成功,病毒滴度达到 6.5×107 pfu·mL-...
SS能够抑制肿瘤细胞的增殖,其与肿瘤的关系已成为肿瘤学的研究热点。本研究将包装获得的靶向生长抑素的lv-shRNA病毒液感染肿瘤细胞MFC,同时,以pcDNA3.1-SS(pSS)转染细胞组作为SS过表达细胞对照,通过荧光显微镜观察到了GFP的高效表达,RIA检测发现49.55%(P<0.05)的SS受到了抑制。MTT法绘制细胞的生长曲线可知,pSS转染细胞的生长明显受到抑制,抑制效率为8.14%...
SS能够抑制肿瘤细胞的增殖,其与肿瘤的关系已成为肿瘤学的研究热点。本研究将包装获得的靶向生长抑素的lv-shRNA病毒液感染肿瘤细胞MFC,同时,以pcDNA3.1-SS(pSS)转染细胞组作为SS过表达细胞对照,通过荧光显微镜观察到了GFP的高效表达,RIA检测发现49.55%(P<0.05)的SS受到了抑制。MTT法绘制细胞的生长曲线可知,pSS转染细胞的生长明显受到抑制,抑制效率为8.14%...
为探讨小干扰RNA(siRNA)对狂犬病病毒(RV)复制的干扰作用,以RV N基因为靶向目标,设计合成4对编码siRNA的DNA序列,然后分别连接到载体pRNATU6.3Hygro上,转染BHK细胞,在潮霉素B抗性压力下筛选出4个阳性细胞株(BHKN1、BHKN2、BHKN3和BHKN4)。用100TCID50 CVS11毒分别感染24孔板内的上述细胞,利用Realtime RT...
为探讨小干扰RNA(siRNA)对狂犬病病毒(RV)复制的干扰作用,以RV N基因为靶向目标,设计合成4对编码siRNA的DNA序列,然后分别连接到载体pRNATU6.3Hygro上,转染BHK细胞,在潮霉素B抗性压力下筛选出4个阳性细胞株(BHKN1、BHKN2、BHKN3和BHKN4)。用100TCID50 CVS11毒分别感染24孔板内的上述细胞,利用Realtime RT...
对筛选的转录猪瘟病毒石门株3′-UTR shRNA的PK-15细胞株P-1(114~132位)、P-2(136~154位)和P-3(209~227位)分别接种猪瘟病毒(CSFV),在接毒后第72和96小时用半定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测CSFV NS3基因及β-actin基因,以研究构建细胞株在转录水平上对CSFV增殖干扰的效果;接毒后第72、96和148小时以酶联免疫吸附试验(...
【目的】通过靶向PRRSV基因组中的M基因的siRNA来抑制PRRSV在Marc145细胞中的复制。【方法】构建4个能转录小发夹RNAshRNA)的质粒,将其与靶蛋白表达质粒共转染HEK293A细胞,观察荧光或进行半定量PCR;或将其转染Marc145细胞,感染PRRSV后进行IFA、TCID50和实时PCR检测。【结果】shRNA表达质粒对M融合蛋白表达的抑制率约为50%,使M真核质粒表达蛋白...
分别用半定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测了筛选的3株分别转录猪瘟病毒石门株3′-UTR 209~227位,136~154位和114~132位shRNA的PK-15细胞株P-1,P-2和P-3在接种猪瘟病毒石门株72 h,96 h 和72 h,96 h,148 h后对病毒增殖的干扰。结果表明,P-1,P-2和P-3细胞株均能在RNA和病毒蛋白水平上...
利用生物学软件分析猪瘟病毒基因组NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的干扰序列,化学合成这些序列,然后退火连接为双链干扰片段,再定向克隆到干扰载体中,将酶切和序列测定鉴定正确的重组载体命名为pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3、pGene-NS3-Negative。重组干扰载体经纯化后转染PK-15细胞,并进行G418抗性筛选。克隆细胞扩大培养后,接种猪瘟病毒S...
利用生物学软件分析猪瘟病毒基因组NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的干扰序列,化学合成这些序列,然后退火连接为双链干扰片段,再定向克隆到干扰载体中,将酶切和序列测定鉴定正确的重组载体命名为pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3、pGene-NS3-Negative。重组干扰载体经纯化后转染PK-15细胞,并进行G418抗性筛选。克隆细胞扩大培养后,接种猪瘟病毒S...

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