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本发明提供一种检测百合中车前草花叶病毒的实时荧光定量PCR方法。包括取待测百合植株的叶片，提取总RNA；以提取的百合叶片总RNA为模板，进行逆转录反应获得cDNA；以获得的cDNA为模板，利用特异性引物对CP?2F/R进行基于荧光染料SYBRGreenI的实时荧光定量PCR检测；以不同浓度的含检测基因片段的质粒PlAMV?CP2标准品为模板制作标准曲线；根据检测结果Cq值判断植株的带病情况，根据标...
钝裂银莲花花色素合成相关基因qRT-PCR内参基因的筛选
钝裂银莲花 实时荧光定量PCR 内参基因 筛选 稳定性 类黄酮/花青素合成途径
2021/3/12
为了筛选适合于钝裂银莲花类黄酮/花青素合成途径中相关基因qRT-PCR表达分析时的内参基因，根据钝裂银莲花蓝/白不同花色花器官组织的转录组测序结果，选取了多聚泛素酶基因（polyubiquitin，UBQ）、微管蛋白基因（β-tubulin，β-TUB）、水通道蛋白基因（aquaporin，AQP）、肌动蛋白基因（actin，ACT）、甘油醛–3–磷酸–脱氢酶基因（glyceraldehyde-3...
以朱顶红（Hippeastrum vittatum）不同组织器官为试验材料，通过实时荧光定量PCR技术检测肌动蛋白基因（ACT）、亲环蛋白基因（CYP）、转录延伸因子基因（EF-1α）、甘油醛–3–磷酸脱氢酶基因（GAPDH、GAPDH2）、α微管蛋白基因（TUA）和β微管蛋白基因（TUB）这7个常用的看家基因的表达水平，并利用geNorm、NormFinder和BestKeeper综合评价其表达...
根据地毯草黄单胞菌花叶万年青致病变种（Xanthomonas axonopodis pv. dieffenbachiae）的RAPD序列设计特异性引物，并对羧基化磁珠的结合性能进行检验，从而建立和优化了免疫磁性分离–PCR体系，对安祖花细菌性枯萎病进行早期检测。结果表明：1 mg磁珠对多克隆抗体最大吸附值为0.268 mg，进行免疫磁性捕获时免疫磁珠的最佳浓度是0.566 ~ 0.741 mg ?...
钩距虾脊兰ISSR-PCR反应体系的建立与优化
钩距虾脊兰 DNA提取 ISSR分子标记
2009/11/25
［目的］为钩距虾脊兰种质资源研究奠定基础。［方法］以钩距虾脊兰为试验材料，利用改良的 CTAB 法提取钩距虾脊兰基因组 DNA，并对影响 ISSR 扩增反应的各因素进行优化。［结果］获得了高质量的钩距虾脊兰基因组 DNA；同时，建立了最适的钩距虾脊兰 ISSRPCR 体系，即25 μl PCR 反应体积中，2.5 μl 10×PCR buffer，2.0 mmol/L MgCl2，100 ng...
Discrimination among Japanese Species of the Orius Flower Bugs (Heteroptera: Anthocoridae) Based on PCR-RFLP of the Nuclear and Mitochondrial DNAs
natural enemy predatory bugs species identification internal transcribed spacer 1 cytochrome oxidase subunit I
2009/9/9
A PCR-RFLP-based method of species identification was considered for 5 Japanese species of Orius Wolff flower bugs, Orius strigicollis (Poppius), O. minutus (Linnaeus), O. sauteri (Poppius), O. nagaii...
喇叭水仙中百合斑驳病毒的RT-PCR检测及序列分析
喇叭水仙 百合斑驳病毒 RT-PCR
2009/8/5
根据基因库中已发表的百合斑驳病毒（Lily mottle virus, LMoV）外壳蛋白基因序列设计引物，通过RT-PCR方法从喇叭水仙Narcissus pseudonarcissus‘Pink-charm’ 样品中扩增出1条大小与试验设计相符的553 bp的特异性LMoV RT-PCR带。扩增产物序列分析表明：与GenBank中百合斑驳病毒百合分离物核苷酸相似性在90%以上。将该序列翻译为外...
送春与多花兰杂种ISSR-PCR 反应体系的建立与优化
ISSR 反应体系 正交设计
2009/7/15
[ 目的] 建立与优化送春与多花兰杂种ISSR- PCR 的反应体系。[ 方法] 用CTAB 法提取送春、多花兰和送春×多花兰杂种的基因
组DNA, 针对ISSR-PCR 扩增的体系中的Taq 酶浓度、Mg2 + 浓度、dNTP 浓度和引物的用量4 个因素, 进行L9(43) 正交试验, 用引物UBC827扩增两亲本的混合DNA, 所得PCR 产物在琼脂糖凝胶上检测, 同时针对去离子甲酰胺对反应...
Development of the Sf-RNase Gene-Specific PCR Primer Set for Japanese Apricot (Prunus mume Sieb. et Zucc.)
PCR Japanese Apricot S-RNase
2009/7/13
Self-compatible cultivars of Japanese apricot (Prunus mume Sieb. et Zucc.) have a horticultural advantage over self-incompatible ones because no cross-pollinizer tree is required. Self-incompatibility...
龙牙百合DNA 的提取及I SSR- PCR 体系的建立
龙牙百合 DNA 提取 ISSR- PCR
2009/6/26
[ 目的] 研究龙牙百合总DNA 的提取方法, 建立优化的ISSR-PCR 反应体系和程序, 为种质资源研究奠定基础。[ 方法] 利用改良
的CTAB 法提取龙牙百合基因组DNA, 并对影响ISSR 扩增反应的各因素进行优化。[ 结果] 获得了高质量的龙牙百合基因组DNA; 优化
的龙牙百合ISSR-PCR 反应体系为,25 μl 体系中含60 ng 模板DNA,0 .4 μmol/ L I...
卷丹百合RAPD-PCR 反应体系的单因素逐项优化研究
卷丹百合 RAPD 体系优化
2009/6/26
[ 目的] 探索建立卷丹百合RAPD- PCR 反应的最适体系。[ 方法] 用CTAB 法提取卷丹百合的基因组DNA, 通过采用单因素逐项优
化的方法, 对影响卷丹百合RAPD-PCR 扩增的反应组分浓度进行优化。[ 结果] 反应结果显示RAPD 对模板的适应性很大; 体系中Mg2 +
在1 .5 ～3 .0 μl 都能产生较清晰的RAPD 带;dNTP 较适合的浓度范围为0 .4 ～1 .6...
温郁金ISSR- PCR反应体系的建立及条件优化
郁金 体系优化 ISSR- PCR
2009/6/18
[ 目的] 寻找一个可用于温郁金ISSR- PCR 的最适宜反应体系。[ 方法] 利用CTAB 法提取基因组DNA , 同时利用PCR 扩增技术和
方法, 对引物、模板DNA、Mg2 + 、dNTP、Taq 聚合酶等反应条件进行优化。[ 结果] 反应体系的最佳条件是总体积为25 μl , 其中Mg2 + 浓度(25mmol/ L) 2 .2 μl , Taq 聚合酶( 5 U/ μl)0 .4...
卷丹百合RAPD-PCR反应体系的正交优化
卷丹百合 RAPD 正交设计 体系优化
2009/5/12
以CTAB法提取卷丹百合的基因组DNA，采用正交试验对影响卷丹百合RAPD-PCR扩增的反应组分浓度进行优化。结果表
明，最佳的RAPD-PCR反应体系（20 μl）中含:10×buffer 2μl，模板DNA 60 ng，Mg2＋1.875 mmol/L，dNTP 0.8 mmol/L，引物30 ng及Taq 酶
0.5 U。
牡丹ISSR-PCR 反应体系正交优化设计
牡丹 ISSR-PCR 正交设计 反应体系
2009/4/27
以“凤丹”（Paeonia ostii）基因组DNA为模板，采用正交试验设计方法，研究牡丹ISSR 反应体系的影响因素，建立了适合牡丹的
ISSR 反应体系及程序。10 μl反应体系为院1×反应缓冲液，2.5 mmo1/L Mg2+，0.4 mmo1/L dNTPs，1.0U Taq聚合酶，0.75 μmol/L引物，10~20 ng模板DNA。反应程序为:94 ℃预变性3 min；94 ℃变性...